BspQI
BspQI bisa recombinantly ditulis ing E. coli sing bisa ngenali situs tartamtu lan diprodhuksi ing
BspQI, endonuklease restriksi endonuklease IIs, asalé saka galur E. coli rekombinan sing mawa gen BspQI sing dikloning lan diowahi saka Bacillus sphaericus.Bisa ngenali situs tartamtu, lan urutan pangenalan lan situs cleavage kaya ing ngisor iki:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · 3
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Fitur produk
1. Aktivitas dhuwur, pencernaan cepet;
2. Aktivitas bintang sing kurang, njamin pemotongan sing akurat kaya "scalpel";
3. Tanpa BSA lan kewan-asal gratis;
Sensitivitas Metilasi
Dmetilasi:Ora Sensitif;
Dcm metilasi:Ora Sensitif;
CpG Metilasi:Ora Sensitif;
Kondisi panyimpenan
Produk kudu dikirim ≤ 0 ℃;Simpen ing -25 ~ - 15 ℃ kondisi.
Buffer panyimpenan
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500mM KCl, 1.0mM dithiothreitol, 500 µg/ml Albumin Rekombinan, 0. 1% Trition X-100 lan 50% gliserol (pH 7,0 @ 25°C).
Definisi Unit
Siji unit ditetepake minangka jumlah enzim sing dibutuhake kanggo nyerna 1µg DNA kontrol Internal sajrone 1 jam ing suhu 50°C kanthi volume reaksi total 50 µL.
Kontrol kualitas
Pengujian Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian BspQI yaiku ≥95% ditemtokake dening analisis SDS-PAGE.
RNase:10U saka BspQI kanthi 1.6μg MS2 RNA sajrone 4 jam ing 50 ℃ ora ngasilake degradasi kaya sing ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
Aktivitas DNase Non-Spesifik:10U saka BspQI kanthi 1μg λ DNA ing 50 ℃ sajrone 16 jam, dibandhingake karo 50 ℃ sajrone 1 jam, ora ngasilake DNA sing berlebihan kaya sing ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
Ligation lan Recutting:Sawise pencernaan 1 μg λDNA kanthi 10U BspQI, fragmen DNA bisa diikat nganggo ligase DNA T4 ing suhu 16ºC.Lan fragmen sing diikat iki bisa dipotong maneh nganggo BspQI.
E. coli DNA: E. coli 16s rDNA-tartamtu TaqMan deteksi qPCR nuduhake yen E.coli ampas genom ≤ 0.1pg / ul.
Sisa protein inang:≤ 50 ppm
Bakteri Endotoksin: LAL-test, miturut Chinese Pharmacopoeia IV edisi 2020, metode tes watesan gel, aturan umum (1143).Isi endotoksin bakteri kudu ≤10 EU/mg.
Sistem lan kahanan reaksi
| Komponen | Volume |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 ugi |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μl |
| dd H2O | Iki 50 μL |
Kondisi reaksi: 50 ℃, 1~ 16 jam.
Inaktivasi panas: 80°C suwene 20 menit.
Sistem lan kahanan reaksi sing disaranake bisa nyedhiyakake efek pencernaan enzim sing relatif apik, sing mung kanggo referensi, waca asil eksperimen kanggo rincian.
Aplikasi produk
Watesan pencernaan endonuklease, Kloning cepet.
Cathetan
1. Volume enzim ≤ 1/10 volume reaksi.
2. Aktivitas bintang bisa kedadeyan nalika konsentrasi gliserol luwih saka 5%.
3. Aktivitas cleavage bisa kedadeyan nalika Substrat ing ngisor rasio sing disaranake.
