CHO HCP ELISA Kit
Metode ELISA immunosorbent siji-langkah digunakake ing tes iki.Sampel sing ngemot CHOK1 HCP bebarengan bereaksi karo antibodi anti-CHOK1 wedhus berlabel HRP lan antibodi anti-CHOK1 sing dilapisi ing piring ELISA, pungkasane mbentuk kompleks sandwich antibodi berlabel HCP fase padhet.Antigen-antibodi sing ora kaiket bisa dibusak kanthi ngumbah piring ELISA.Substrat TMB ditambahake ing sumur kanggo reaksi sing cukup.Pangembangan werna mandheg sawise nambah solusi mandeg, lan nilai OD utawa absorbansi saka solusi reaksi ing 450/650nm diwaca karo maca microplate.Nilai OD utawa nilai absorbansi sebanding karo isi HCP ing solusi.Saka iki, konsentrasi HCP ing solusi bisa diitung miturut kurva standar.
Aplikasi
Kit iki digunakake kanggo ndeteksi kuantitatif isi residu protein sel inang CHOK1 ing conto.
Componèn
| S/N | Komponen | Konsentrasi | Kahanan Panyimpenan |
| 1 | CHOK1 HCP Standar | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤-20 ℃, nglindhungi saka cahya |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, nglindhungi saka cahya |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Stop solusi | NA | RT |
| 6 | Microplate sealers | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Dhuwur adsorpsi pra-lapisan piring | NA | 2-8 ℃ |
Peralatan sing dibutuhake
| Consumables / Peralatan | Pabrikan | Katalog |
| Microplate maca | Piranti Molekul | Spectra Max M5, M5e, utawa padha karo |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, utawa padha karo |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, utawa sing padha |
Panyimpenan lan stabilitas
1.Transportasi ing -25~-15°C.
2.Kondisi panyimpenan minangka ditampilake ing Tabel 1;komponen 1-2 disimpen ≤–20°C, 5-6 disimpen RT,3,4,7,8 disimpen ing 2-8 ℃;periode validitas 12 sasi.
Parameter produk
1.Sensitivitas: 1 ng/mL
2.Range deteksi: 3-100ng/mL
3.Presisi: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.Cakupan HCP:> 80%
5.Kekhususan: Kit iki universal amarga khusus bereaksi karo CHOK1 HCP sing ora gumantung saka proses pemurnian.
Persiapan reagen
1.PBST 0.05%
Njupuk 15 ml 20 × PBST 0,05%, diencerke ing ddH2O, lan digawe nganti 300 ml.
2.1,0% BSA
Njupuk 1g BSA saka botol lan diencerke ing 100 ml PBST 0,05%, aduk nganti rampung larut, lan simpen ing suhu 2-8 ° C.Buffer pengenceran sing disiapake sah kanggo 7 dina.Disaranake nyiyapake yen perlu.
3.Solusi deteksi 2μg/mL
Njupuk 48μL saka 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP lan encer ing 11,952μL saka 1% BSA kanggo entuk konsentrasi pungkasan saka 2μg/mL solusi deteksi.
4.QC lan Persiapan Standar CHOK1 HCP
| tabung Ora. | Asli | Konsentrasi | Volume | 1% BSA | Total Volume | Pungkasan |
| A | Standar | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabel: Persiapan QC lan Standar
Prosedur Assay
1.Siapke reagen kaya sing dituduhake ing "Persiapan Reagen" ing ndhuwur.
2.Njupuk 50μL standar, conto lan QC (waca Tabel 3) menyang saben sumur, banjur tambahake 100μL larutan Deteksi (2μg/mL);Tutup piring nganggo sealer, lan lebokake piring ELISA ing thermomixer.Inkubasi ing 500rpm, 25±3 ℃ suwene 2 jam.
3.Balikake microplate ing sink lan copot solusi lapisan.Pipet 300μL PBST 0,05% ing saben sumur kanggo ngumbah piring ELISA lan mbuwang solusi kasebut, lan baleni ngumbah kaping 3.Walik piring ing andhuk kertas sing resik lan garing.
4.Tambah 100μL substrat TMB (pirsani Tabel 1) kanggo saben sumur, tutup piring ELISA, lan inkubasi ing peteng ing 25±3 ℃ kanggo 15 menit.
5.Pipet 100 μL stop solution ke dalam masing-masing sumuran.
6.Ukur absorbansi ing dawa gelombang 450/650nm kanthi maca microplate.
7.Analisis data nganggo SoftMax utawa piranti lunak sing padha.Plot kurva standar kanthi nggunakake model regresi logistik papat parameter.
Tuladha Kurva Standar
CATETAN: Yen konsentrasi HCP ing sampel ngluwihi wates ndhuwur kurva standar, iku perlu diencerke kanthi bener karo buffer pengenceran sadurunge testing.
CATATAN
Solusi mandeg yaiku asam sulfat 2M, mangga ditangani kanthi ati-ati supaya ora cipratan!
