DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) minangka endodeoxyribonuclease sing bisa nyerna DNA untai tunggal utawa ganda.Iki ngenali lan mecah ikatan fosfodiester kanggo ngasilake monodeoxynucleotides utawa oligodeoxynucleotides untai tunggal utawa ganda karo gugus fosfat ing terminal 5′ lan hidroksil ing terminal 3′.Aktivitas DNase I gumantung marang Ca2+ lan bisa diaktifake dening ion logam divalen kayata Mn2+ lan Zn2+.5mM Ca2+ nglindhungi enzim saka hidrolisis.Ing ngarsane Mg2+, enzim bisa kanthi acak ngenali lan mecah situs ing sembarang untaian DNA.Ing ngarsane Mn2+, untaian ganda saka DNA bisa bebarengan dikenali lan dibelah ing situs meh padha kanggo mbentuk fragmen DNA mburi flat utawa fragmen DNA pungkasan caket karo 1-2 nukleotida nonjol.
Properti produk
Bovine Pancreas DNase I dituduhake ing sistem ekspresi ragi lan diresiki.
Componèn
| Komponen | Volume | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, bebas RNase | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transportasi lan Panyimpenan
1. Stabilitas Panyimpenan: - 15 ℃ ~ -25 ℃ kanggo panyimpenan;
2.Transport Stabilitas: Transport ing ngemas es;
3. Diwenehake ing: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliserol, pH 7,6 ing 25 ℃.
Definisi Unit
Siji unit ditetepake minangka jumlah enzim sing bakal ngrusak 1 µg DNA pBR322 kanthi lengkap sajrone 10 menit ing suhu 37 ° C.
Kontrol kualitas
RNase:5U saka DNase I kanthi 1,6 μg MS2 RNA sajrone 4 jam ing 37 ℃ ora ngasilake degradasi kaya sing ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
Bakteri Endotoksin:LAL-test, miturut Chinese Pharmacopoeia IV edisi 2020, metode tes watesan gel, aturan umum (1143).Isi endotoksin bakteri kudu ≤10 EU/mg.
Pandhuan kanggo Gunakake
1. Siapke solusi reaksi ing tabung bebas RNase miturut proporsi ing ngisor iki:
| Komponen | Volume |
| RNA | X ugi |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, bebas RNase (5U/μL) | 1 U saben μg RNA |
| ddH2O | Nganti 10 μL |
2,37 ℃ suwene 15 menit;
3.Tambah buffer mandap kanggo mungkasi reaksi, lan panas ing 65 ℃ kanggo 10 menit kanggo mateni DNase I. Sampel bisa langsung digunakake kanggo eksperimen transkripsi sabanjuré.
Cathetan
1. Gunakake 1U DNase I saben μg RNA, utawa 1U DNase I kurang saka 1μg RNA.
2.EDTA kudu ditambahake menyang konsentrasi akhir 5 mM kanggo nglindhungi RNA saka degradasi sajrone inaktivasi enzim.
