Robusstart Taq DNA Polymerase
Robusart Taq DNA Polymerase minangka polimerase DNA wiwitan sing panas.Produk iki ora mung bisa nyandhet reaksi non-spesifik sing disebabake dening anil non-spesifik saka primer utawa agregasi primer ing proses persiapan lan amplifikasi sistem PCR.Mulane, wis specificity banget lan luwih efektif kanggo amplifikasi cithakan konsentrasi kurang, lan iku cocok kanggo reaksi amplifikasi PCR multiplexed.Kajaba iku, produk iki nduweni aplikasi sing apik banget, lan asil amplifikasi sing stabil bisa dipikolehi ing macem-macem jinis reaksi PCR.
Komponen
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ gratis) (opsional)
3.25 mM MgCl2(opsional)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ gratis) ora ngemot dNTP lan Mg²+, mangga tambahake dNTP lan MgCl2nalika nyiapake sistem reaksi.
Aplikasi sing Disaranake
1.amplifikasi cepet.
2.Multiple amplifikasi.
3.Amplifikasi langsung getih, swab, lan conto liyane.
4.Deteksi penyakit pernapasan.
Kondisi panyimpenan
-20 ° C kanggo panyimpenan jangka panjang, kudu dicampur kanthi becik sadurunge digunakake, supaya ora beku-thaw.
*Yen presipitasi sawise kulkas, iku normal;dianjurake kanggo equilibrate kanggo suhu kamar sadurunge nyawiji lan nggunakake.
Definisi Unit
Siji unit aktif (U) ditetepake minangka jumlah enzim sing nggabungake 10 nmol deoxyribonucleotide menyang bahan sing ora larut asam ing suhu 74 ° C suwene 30 menit nggunakake DNA sperma salmon aktif minangka template / primer.
Kontrol kualitas
1.SDS-PAGE kemurnian elektroforesis luwih saka 98%.
2.Sensitivitas amplifikasi, kontrol batch-to-batch, stabilitas.
3.Ora ana aktivitas nuklease eksogen, ora ana kontaminasi endonuklease eksogen utawa eksonuklease
instruksi
Setelan Reaksi
| Komponen | Volume (μL) | Konsentrasi pungkasan |
| 10 × PCR Buffer II (Bebas Mg²+)a | 5 | 1× |
| dNTPs (10mM saben dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robusstart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Primer campuranb | 2 | 1× |
| Cithakan | - | < 1 μg / reaksi |
| ddH2O | Kanggo 50 | - |
Cathetan:
1) a.Buffer ora ngemot dNTP lan Mg²+, mangga tambahake dNTP lan MgCl2nalika nyiapake sistem reaksi.
2) b.Yen digunakake kanggo qPCR / qRT-PCR, probe fluoresensi kudu ditambahake menyang sistem reaksi.Biasane, konsentrasi primer pungkasan 0,2 μM bakal menehi asil sing apik;yen kinerja reaksi kurang, konsentrasi primer bisa diatur ing kisaran 0,2-1 μM.Konsentrasi probe biasane dioptimalake ing kisaran 0,1-0,3 μM.Eksperimen gradien konsentrasi bisa ditindakake kanggo nemokake kombinasi primer lan probe sing paling apik.
Protokol siklus termal
| PCR biasaproses | |||
| Langkah | Suhu | Wektu | Siklus |
| Pra-denaturasi | 95 ℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10-20 detik | 40-50 |
| Annealing / Extension | 56-64 ℃ | 20-60 detik | |
| PCR cepetproses | |||
| Langkah | Suhu | Wektu | Siklus |
| Pra-denaturasi | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 1-5 sec | 40-45 |
| Annealing / Extension | 56-64 ℃ | 5-20 detik | |
Cathetan
1.Tingkat amplifikasi DNA polimerase cepet ngirim ora kurang saka 1 kb/10 s.Tingkat munggah lan tiba suhu, mode kontrol suhu lan efisiensi konduksi panas instrumen PCR beda-beda beda-beda, saéngga dianjurake kanggo ngoptimalake kondisi reaksi sing optimal kanggo instrumen PCR cepet tartamtu.
2.Sistem kasebut gampang adaptasi, kanthi spesifik lan sensitivitas sing luwih dhuwur.
3.Cocog kanggo digunakake minangka reagen deteksi PCR sensitivitas dhuwur, lan bisa digunakake ing reaksi amplifikasi PCR multiplex.
4.Aktivitas polimerase 5′→3′, aktivitas eksonuklease 5′→3′;ora 3′→5′ aktivitas exonuclease;ora ana fungsi proofreading.
5.Cocog kanggo tes kualitatif lan kuantitatif PCR lan RT-PCR.
6.Pungkasan 3′ produk PCR yaiku A, sing bisa langsung dikloning dadi vektor T.
7.Cara telung langkah dianjurake kanggo primer kanthi suhu anil sing kurang utawa kanggo amplifikasi fragmen luwih saka 200 bp.
