RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Produk iki ngemot buffer reaksi, Campuran RT-Enzim (Bst DNA polymerase lan transkripase terbalik tahan panas), Protectants lyophilized lan komponen pewarna kromogenik.Kanggo nggunakake, mung nggunakake Buffer, enzim reaksi lan primer dicampur lan ditambahake menyang cithakan;nambah protectant lyophilized bisa langsung.Iki disambungake menyang lyophilizer lan lyophilized, lan mung primer lan cithakan sing ditambahake nalika digunakake.Kit iki nyedhiyakake deteksi amplifikasi visual sing cepet lan jelas, sing reaksi negatif dituduhake kanthi warna abang lan reaksi positif dituduhake kanthi owah-owahan dadi kuning.
Komponen
| Komponen | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Buffer Amplifikasi Loop-mediated (kanthi pewarna) | 0,96 ml | 4,80 mL × 2 | 9,60 mL × 10 |
| RT-Enzim Campuran | 270 l | 2,70 ml | 2,70 mL × 10 |
| Proteksi lyophilized | 0,96 mL × 2 | 9,60 mL × 2 | 9,60 mL × 20 |
Aplikasi
Kanggo amplifikasi isotermal DNA utawa RNA.
Kahanan Panyimpenan
Diangkut nganggo es garing, disimpen ing -25 ~ -15 ℃.Aja kerep beku-thaw, produk sah kanggo 12 sasi.
Protokol
1.Cairan buffer reaksi sing bakal digunakake ing suhu kamar.Vortex sedhela utawa kuwalik tabung kaping pirang-pirang kanggo nyampur sak tenane, banjur centrifuge kanggo ngumpulake Cairan menyang ngisor tabung.
2.Preparation saka sistem reaksi.Reagen iki bisa disiapake ing rong sistem reaksi, campuran reaksi cair lan campuran sistem lyophilized.
1) Siapke campuran reaksi cair
| Komponen | Volume |
| Buffer Amplifikasi Loop-mediated (kanthi pewarna) | 10 μL |
| RT-Enzim Campuran | 2,8 l |
| 10 × Campuran Primera | 5 μl |
| Cithakan DNA/RNA b | × μL |
| Banyu Nuklease | Iki 50 μL |
2) Campuran sistem Lyophilization
① Siapke campuran lyophilized
| Komponen | Volume |
| Buffer Amplifikasi Loop-mediated (kanthi pewarna) | 10 μL |
| Proteksi lyophilized | 20 μL |
| RT-Enzim Campuran | 2,8 l |
| Banyu Nuklease | Iki 50 μL |
② Lyophilization: Campuran sing wis disiapake wis diliofilisasi ing sistem 50μL
③ Siapke campuran reaksi
| Komponen | Volume |
| Campuran lyophilized | 1 bêsik |
| 10 × Campuran Primera | 5 μl |
| Cithakan DNA/RNA b | × μL |
| Banyu Nuklease | Iki 50 μL |
Cathetan:
1) a.10×Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (larut banyu) dianjurake kanggo asam nukleat templ.
1.Inkubasi ing 65 ° C kanggo 30-45mins, kang bisa ditambahi jumbuh miturut owah-owahan werna wektu Reaksi.
2.Miturut mripat langsung, kuning positif lan abang negatif.
Cathetan
1.Uyah bisa katon ing ngisor tabung buffer, vortex sedhela utawa tabung invert kaping pirang-pirang kanggo nyampur sak tenane ing suhu kamar.
2.Suhu reaksi bisa dioptimalake antarane 62 ℃ lan 68 ℃ miturut kondisi primer.
3.Reagen sing dikemas kudu ora kena ing udara kanggo wektu sing suwe.
4.Reaksi perubahan warna abang lan kuning gumantung marang owah-owahan pH sistem reaksi, aja nganggo solusi panyimpenan asam nukleat Tris sing ngemot, dianjurake kanggo nggunakake ddH2O disimpen asam nukleat;
5.Eksperimen kudu standar, kalebu nyiapake sistem reaksi, lyophilization, lan pangolahan sampel lan proses nambah sampel;
6.Kanggo supaya kontaminasi, dianjurake kanggo nyiyapake sistem reaksi ing bench Ultra-resik, ing liyane Tambah cithakan kanggo hood fume saka kamar supaya gangguan positif palsu.
