UDG/UNG Enzim
UDG(urasil DNA glikosilase) bisa katalis hidrolisis link N-glikosidik antara basa urasil lan backbone gula-fosfat ing ssDNA lan dsDNA.Bisa gampang ngontrol polusi aerosol lan cocok kanggo sistem biologi molekuler umum kayata PCR, qPCR, RT-qPCR lan LAMP.
Spesifikasi
| Host Ekspresi | Rekombinan E. coliwith uracil DNA glikosilase gen |
| Bobot Molekul | 24. 8kDa |
| Kemurnian | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inactivation panas | 95 ℃, 5 ~ 10 min |
| Definisi Unit | Siji unit (U) ditetepake minangka jumlah enzim sing dibutuhake kanggo katalis hidrolisis l μg dU-containing dsDNA sajrone 30 menit ing 25 ℃. |
Lumbung
Produk kudu disimpen ing-25 ℃ ~ -15 ° C kanggo rong taun.
instruksi
1.Persiapan campuran reaksi PCR miturut sistem ing ngisor iki
| Komponen | Volume (μL) | Konsentrasi pungkasan |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol / L |
| DUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol / L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol / lempung |
| Cithakan DNA | X | - |
| Primer 1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol / L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol / L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Nganti 50 | - |
Cathetan: Miturut syarat eksperimen, konsentrasi akhir dUTP bisa diatur antarane 0.2-0.6 mmol/L, lan 0.2 mmol/L dTTP bisa ditambah kanthi selektif.
2.Prosedur amplifikasi
| Siklus langkah | Suhu | Wektu | Siklus |
| degradasi cithakan sing ngemot dU | 25 ℃ | 10 menit | 1 |
| Aktivasi UDG, denaturasi awal cithakan | 95 ℃ | 5 ~ 10 menit | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Ekstensi | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| extension pungkasan | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Cathetan: Wektu reaksi ing 25 ° C bisa diatur sajrone 5-10 menit miturut syarat eksperimen.
Cathetan
1.UDG aktif ing paling buffer reaksi PCR.
2.Enzim kudu disimpen ing kothak es utawa ing adus es nalika digunakake, lan kudu disimpen ing suhu-20 ° C sanalika sawise digunakake.
3.Mangga nganggo PPE sing dibutuhake, jas lab lan sarung tangan, kanggo njamin kesehatan lan safety sampeyan!
