Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (Bebas Gliserol)
Bst DNA polymerase V2 asalé saka Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, sing nduweni aktivitas polimerase DNA 5′→3′ lan aktivitas penggantian rantai sing kuwat, nanging ora ana aktivitas exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 saenipun cocok kanggo strand-pamindahan, isothermal amplifikasi LAMP (Loop mediated isothermal amplification) lan urutan cepet.Bst DNA polymerase V2 minangka versi hot-start adhedhasar Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) sing diduweni dening teknologi modifikasi sing bisa dibalik, sing bisa nyandhet aktivitas DNA polimerase ing suhu kamar, saengga sistem reaksi bisa dioperasi lan diformulasikan ing suhu kamar kanggo nyegah non -amplifikasi tartamtu lan nambah efficiency reaksi, lan versi iki bisa lyophilized.Kajaba iku, aktivitase dirilis ing suhu dhuwur, mula ora perlu langkah aktivasi sing kapisah.
Komponen
| Komponen | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimerase V2 (Bebas Gliserol)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikasi
1.amplifikasi isotermal LAMP
2.Reaksi perpindahan tunggal untai DNA
3.Urutan gen GC dhuwur
4.Urutan DNA tingkat nanogram.
Kondisi panyimpenan
Transportasi ing ngisor 0 ° C lan disimpen ing -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisi Unit
Siji unit ditetepake minangka jumlah enzim sing nggabungake 25 nmol dNTP dadi bahan sing ora larut asam sajrone 30 menit ing suhu 65 ° C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian Bst DNA polimerase V2 yaiku ≥99% ditemtokake dening analisis SDS-PAGE nggunakake deteksi Coomassie Blue.
2.EndonukleaseKegiatan:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1 μg λDNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ℃ ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
3.Aktivitas Eksonuklease:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1 μg λ -Hind Ⅲ nyerna DNA suwene 16 jam ing suhu 37 ℃ ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
4.Aktivitas Nickase:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1 μg pBR322 DNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ° C ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
5.Aktivitas RNase:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1,6 μg MS2 RNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ° C ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
6.E. coliDNA:120 U saka Bst DNA polymerase V2 disaring kanggo anané DNA genom E. coli nggunakake TaqMan qPCR kanthi primer khusus kanggo lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E. coli yaiku ≤1 Salinan.
Reaksi LAMP
| Komponen | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 l |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μl |
| dNTP (masing-masing 10mM) | 3,5 l |
| SYTO™ 16 Ijo (25×)a | 1,0 l |
| Campuran primerb | 6 μl |
| Bst DNA Polimerase V2 (Bebas Gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Cithakan | × μL |
| ddH₂O | Iki 25 μL |
Cathetan:
1) a.SYTOTM 16 Ijo (25 ×): Miturut kabutuhan eksperimen, pewarna liyane bisa digunakake minangka pengganti;
2) b.Campuran primer: dipikolehi kanthi nyampur 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB lan volume liyane.
Reaksi lan Kondisi
1 × HC Bst V2 Buffer, suhu inkubasi antara 60°C lan 65°C.
Inactivation panas
80°C, 20 menit
