2×PCR Super Mix (karo Pewarna)
2× PCR Master Mix ngemot Taq DNA Polymerase, dNTPs, lan komponen liyane sing dibutuhake PCR.Master Mix stabil sajrone 3 wulan ing suhu 4 ℃ kanthi stabilisator khusus.Solusi pra-campuran dioptimalake kanggo PCR konvensional lan siap digunakake kanthi nambah cithakan DNA lan primer.Produk PCR bisa langsung dimuat kanggo elektroforesis nganggo pewarna biru bromofenol sing wis diisi.Produk sing digedhekake ngemot tonjolan 3'-dA lan bisa gampang dikloning dadi vektor T.2×PCR Master Mix nyederhanakake prosedur PCR lan nyuda kontaminasi.
Kahanan Panyimpenan
Produk kudu disimpen ing -25 ℃ ~ -15 ℃ kanggo 2 taun.
Spesifikasi
| Fidelity (vs. Taq) | 1× |
| Wiwitan Panas | No |
| Overhang | 3'-A |
| Polimerase | Taq DNA Polimerase |
| Format Reaksi | SuperMix utawa Master Mix |
| Kacepetan Reaksi | Standar |
| Jinis produk | Campuran Master PCR (2x) |
instruksi
1.Sistem Reaksi
| Komponen | Volume(μL) |
| Cithakan DNA | Cocok |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| 2 × PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | kanggo 50 |
2.Protokol Amplifikasi
| Siklus langkah | Suhu (°C) | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitan | 94 | 5 min | 1 |
| Denaturasi | 94 | 30 sek | 35 |
| Annealing | 50-60 | 30 sek | |
| Ekstensi | 72 | 30-60 sec/kb | |
| extension pungkasan | 72 | 10 min | 1 |
Cathetan:
1) Panggunaan cithakan: 50-200ng DNA genom;DNA plasmid 0,1-10 ng.
2) Mg2+konsentrasi: Produk iki ngandhut 3mM MgCl2, cocok kanggo reaksi PCR paling.
3) Suhu Annealing: Mangga deleng nilai Tm teoritis primer.Suhu annealing bisa disetel dadi 2-5 ℃ luwih murah tinimbang nilai teoritis primer.
4) Wektu tambahan: Kanggo identifikasi molekuler, dianjurake 30 sec/kb.Kanggo kloning gen, 60 sec/kb dianjurake.
Cathetan
1.Produk PCR kanthi 2 × PCR Master Mix ora cocok kanggo elektroforesis gel polyacrylamide.
2.Kanggo safety lan kesehatan, mangga nganggo jas lab lan sarung tangan kanggo operasi.
3.Iki digunakake kanggo riset ONLY!
