5×Neoscript Cepet RT-qPCR Premix plus-UNG
Cat Nomer: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) minangka campuran basis probe siji-tabung sing stabil banget sing cocog kanggo transkripsi terbalik siji-langkah lan PCR kuantitatif (qRT-PCR).Ndhukung pre-mixing saka primer lan probe lan tetep stabil sawise panyimpenan dangu ing suhu kurang.Sampel sing bakal diuji bisa ditambahake langsung nalika nggunakake, tanpa operasi bukaan / pipetting tabung tambahan.Produk iki nyedhiyakake komponen, contone, hot-start DNA polymerase, M-MLV, uracil DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (karo dUTP tinimbang dTTP), lan stabilisator.Kanthi reverse transcriptase amplifikasi cepet sing diowahi sacara genetis lan polimerase DNA, bisa ngrampungake amplifikasi PCR sajrone 20-40 menit.Reagen iki nggunakake buffer khusus kanggo qPCR kanthi enzim campuran enzim amplifikasi anti-inhibitor lan enzim UNG.Mulane, bisa entuk amplifikasi gen target sing apik lan nyegah amplifikasi palsu sing disebabake dening polusi PCR lan aerosol.Reagen iki kompatibel karo instrumen PCR kuantitatif fluoresensi saka manufaktur kayata Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad lan Roche.
Komponen
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Kahanan Panyimpenan
Kabeh komponen kudu disimpen ing -20 ℃ kanggo panyimpenan jangka panjang lan 4 ℃ nganti 3 sasi.Mangga nyampur sak tenane sawise thawing lan centrifuge sadurunge nggunakake.Aja kerep beku-thaw.
qRT-PCR Reaction System Preparation
| Komponen | 25μLSistem | 50μLSistem | Konsentrasi pungkasan |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5 μL | 10 μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1 μL | 2 μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1 μL | 2 μL | 1× |
| Cithakan RNAb | – | – | – |
| ddH2O | Nganti 25μL | Nganti 50μL | – |
1) a.Konsentrasi pungkasan primer biasane 0,2μM.Kanggo asil sing luwih apik, konsentrasi primer bisa dioptimalake ing kisaran 0.2-1μM.Umumé, konsentrasi probe bisa dioptimalake ing kisaran 0.1-0.3μM.
2) b. Nalika nggunakake Prosedur PCR sing cepet, nambah konsentrasi primer lan probe bisa nyebabake asil amplifikasi sing luwih apik, lan rasio kasebut kudu dioptimalake.
3) Jinis sampel sing beda-beda ngemot jinis lan konten inhibitor lan nomer salinan gen target.Volume sampel kudu dianggep miturut kondisi nyata.Nggawe pengenceran saka sampel karo banyu nuklease-free utawa TE Buffer, yen perlu.
Reaksi Ckahanan
| Prosedur PCR Biasa | Prosedur PCR Cepet | ||||||
| tata cara | Temp. | Wektu | Sepeda; Pit; ontel | tata cara | Temp. | Wektu | Sepeda; Pit; ontel |
| Reverse Transkripsi | 50 ℃ | 10-20min | 1 | Reverse Transkripsi | 50 ℃ | 5 menit | 1 |
| Polimerase Aktifake | 95 ℃ | 1-5min | 1 | Polimerase Aktifake | 95 ℃ | 30s | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 | Denaturasi | 95 ℃ | 1-3s | 40-50 |
| Annealing lan Ekstensi | 56-64 ℃ | 20-60s | Annealing lan Ekstensi | 56-64 ℃ | 3-20s | ||
Kontrol kualitas
1.Deteksi fungsi: sensitivitas, spesifisitas lan keterulangan qPCR.
2.Ora ana aktivitas nuklease eksogen: ora ana endonuklease eksogen lan polusi eksonuklease.
Cathetan
1.Tingkat amplifikasi DNA polimerase cepet ora kurang saka 1kb/10s.Instrumen PCR sing beda-beda duwe kecepatan pemanasan lan pendinginan sing beda-beda, mode kontrol suhu lan konduktivitas termal, lan kanthi mangkono ngoptimalake konsentrasi primer/probe lan cara mlaku ing kombinasi karo instrumen PCR cepet spesifik sampeyan penting.
2.Produk iki bisa ditrapake kanthi wiyar, lan cocok kanggo diagnosa molekuler sensitivitas dhuwur.Cara PCR telung langkah dianjurake kanggo primer kanthi suhu anil sing sithik utawa kanggo amplifikasi fragmen dawa luwih saka 200 bp.
3.Amarga amplicon beda duwe efisiensi panggunaan dUTP sing beda lan sensitivitas sing beda karo UNG, reagen kudu dioptimalake yen sensitivitas deteksi mudhun nalika nggunakake sistem UNG.Hubungi kita kanggo dhukungan teknis yen perlu.
4.Kanggo ngindhari amplifikasi produk PCR, area eksperimen khusus lan pipette dibutuhake kanggo amplifikasi.Operasi nganggo sarung tangan lan ganti kanthi asring lan aja mbukak tabung PCR sawise amplifikasi.
