Bst 2.0 DNA Polimerase (Bebas Gliserol)
Bst DNA polymerase V2 asalé saka Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, sing nduweni aktivitas polimerase DNA 5′→3′ lan aktivitas penggantian rantai sing kuwat, nanging ora ana aktivitas exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 saenipun cocok kanggo strand-pamindahan, isothermal amplifikasi LAMP (Loop mediated isothermal amplification) lan urutan cepet.
Komponen
| Komponen | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerase V2(Bebas Gliserol)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikasi
1.LAMPU isotermal amplifikasi
2. DNA untai reaksi perpindahan tunggal
3. Urutan gen GC dhuwur
4. Urutan DNA tingkat nanogram.
Kondisi panyimpenan
Transportasi ing ngisor 0 ° C lan disimpen ing -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisi Unit
Siji unit ditetepake minangka jumlah enzim sing nggabungake 25 nmol dNTP dadi bahan sing ora larut asam sajrone 30 menit ing suhu 65 ° C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian Bst DNA polimerase V2 yaiku ≥99% ditemtokake dening analisis SDS-PAGE nggunakake deteksi Coomassie Blue.
2.Aktivitas Eksonuklease:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1 μg λ -Hind Ⅲ nyerna DNA suwene 16 jam ing suhu 37 ℃ ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
3.Aktivitas Nickase:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1 μg pBR322 DNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ° C ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
4.Aktivitas RNase:Inkubasi reaksi 50 μL sing ngemot minimal 8 U Bst DNA polimerase V2 kanthi 1,6 μg MS2 RNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ° C ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
5.E. coli DNA:120 U saka Bst DNA polymerase V2 disaring kanggo anané DNA genom E. coli nggunakake TaqMan qPCR kanthi primer khusus kanggo lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E. coli yaiku ≤1 Salinan.
Reaksi LAMP
| Komponen | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 l |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μl |
| dNTP (masing-masing 10mM) | 3,5 l |
| SYTO™ 16 Ijo (25×)a | 1,0 l |
| Campuran primerb | 6 μl |
| Bst DNA Polimerase V2 (Bebas Gliserol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Cithakan | × μL |
| ddH₂O | Iki 25 μL |
Cathetan:
1) a.SYTOTM 16 Ijo (25 ×): Miturut kabutuhan eksperimen, pewarna liyane bisa digunakake minangka pengganti;
2) b.Campuran primer: dipikolehi kanthi nyampur 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB lan volume liyane.
Reaksi lan Kondisi
1 × HC Bst V2 Buffer, suhu inkubasi antara 60°C lan 65°C.
Inactivation panas
80 ° C, 20 menit
