Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat Nomer: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG minangka reagen khusus sing dirancang kanggo reaksi kualitatif lan kuantitatif PCR Wektu Nyata nggunakake deteksi basis probe, dikembangake khusus kanggo proses lyophilization.Isine enzim hot-start anyar Hotstart Taq plus (DG), sing nduweni aktivitas enzim Taq sing disegel ing suhu kamar, kanthi efektif nyandhet amplifikasi non-spesifik sing disebabake dening anil non-spesifik primer utawa pembentukan dimer primer ing kondisi suhu sing sithik, saéngga nambah. spesifisitas reaksi amplifikasi.Reagen iki nggunakake buffer khusus qPCR sing dioptimalake lan sistem anti-kontaminasi UNG / dUTP kanggo entuk wiwitan panas kanthi cepet, ningkatake efisiensi lan sensitivitas reaksi qPCR.Bisa entuk kurva standar sing apik ing macem-macem wilayah kuantitatif lan kanthi akurat nindakake jumlah, kanthi efektif nyegah amplifikasi positif palsu sing disebabake dening produk PCR residual utawa kontaminasi aerosol.Reagen iki kompatibel karo paling instrumen PCR kuantitatif fluoresensi saka manufaktur kayata Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad lan Roche etc., lan nuduhake stabilitas apik ing wangun lyophilized.
Komposisi reagen
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bebas) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (opsional)
Kahanan Panyimpenan
panyimpenan long-term ing -20 ℃;bisa disimpen ing 4 ℃ nganti 3 sasi.Nyampur uga sadurunge nggunakake lannyegah pembekuan lan thawing bola-bali.
Protokol Cycling
| tata cara | Temp. | Wektu | Sepeda; Pit; ontel |
| Pencernaan | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Aktivasi polimerase | 95 ℃ | 1~5 min | 1 |
| Denatur | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Annealing lan Extension | 56~64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction System Preparation
|
Komposisi |
Volume 25 µL |
Volume 50 µL |
Konsentrasi pungkasan |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+bebas) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250 mm MgCl2 | 0,45µL | 0,9µL | 4,5 mM |
| 4× liyoprotektor1 | 6,25µL | 12,5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Cithakan DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Iki 25µL | Iki 50µL | —— |
1. Konsentrasi pungkasan 0.2μM kanggo primer biasane ngasilake asil sing apik;nalika kinerja reaksi kurang, atur konsentrasi primer ing kisaran 0.2-1μM yen perlu.Konsentrasi probe biasane dioptimalake ing kisaran 0.1-0.3μM liwat eksperimen gradien kanggo nemokake kombinasi sing optimal.
2. Jumlah salinan gen target sing ana ing macem-macem jinis template beda-beda;yen perlu, pengenceran gradien bisa ditindakake kanggo nemtokake jumlah tambahan cithakan sing optimal.
3. Sistem iki bisa lyophilized;nalika pelanggan nggunakake sistem iki tanpa syarat beku-pangatusan, 4 × lyoprotectant bisa selektif ditambahake; yen ana produk beku-pepe dibutuhake, sak reagen Cairan tahap validasi kinerja produk, iku kudu nambah 4 × lyoprotectant kanggo mesthekake konsistensi karo komponen sistem lyophilized lan efek.
Nalika sistem digunakaked kanggo beku-pangatusan, nyiyapake ing sistem as ing ngisor iki:
| Komposisi | 25µL Sistem Reaksi |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bebas) (DG) | 5µL |
| 250 mm MgCl2 | 0,45µL |
| 4 × liyoprotektor | 6,25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Iki 18 ~ 20µL |
* Yen sistem liyane kanggo beku-pangatusan dibutuhake, mangga takon dhewe.
Proses Lyophilizationss
| tata cara | Temp. | Wektu | kahanan | Tekanan |
| Pra-pembekuan | 4 ℃ | 30 min | terus |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | adhem | ||
| -50 ℃ | 180 min | terus | ||
| Pengeringan Utama | -30 ℃ | 60 min | Pemanasan |
Vakum Ultimate |
| -30 ℃ | 70 min | terus | ||
| Pengeringan Sekunder | 25 ℃ | 60 min | Pemanasan |
Vakum Ultimate |
| 25 ℃ | 300 min | terus |
2. Proses lyophilization ing ndhuwur mung kanggo referensi.Jinis produk sing beda-beda lan pengering beku sing beda duwe paramèter sing beda-beda, saéngga pangaturan bisa ditindakake miturut nyatane.kahanan nalika nggunakake.
3. pangolahan lyophilization beda bisa uga cocok kanggo ukuran kumpulan beda lyophilizedproduk, dadi validasi tes sing cukup kudu ditindakake nalika digunakake kanggo produksi skala gedhe.
Pandhuan kanggo nggunakake lyophilized bubuk
1. Sedhela centrifuge bubuk lyophilized;
2. Tambah cithakan asam nukleat menyang bubuk lyophilized lan nambah banyu nganti 25μL;
3. Nyampur uga dening centrifugation lan mbukak ing mesin.
Kontrol kualitas:
1. Pengujian fungsional: sensitivitas, kekhususan, reproduksibilitas qPCR.
2. Ora ana aktivitas nuklease eksogen, ora ana kontaminasi endo / eksonuklease eksogen.
Informasi Teknis:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG nggunakake enzim wiwitan panas novel sing ngidini wiwitan panas kanthi cepet sajrone 1 ~ 5 menit;liwat formulasi buffer khusus cocok kanggo reaksi PCR kuantitatif neon multiplex.
2. Wis specificity luwih kang Ngartekno mbenakake sensitivitas deteksi watesan PCR fluoresensi kuantitatif, nggawe kurva amplifikasi normalisasi, Nilai fluoresensi entuk dandan ketok ing cithakan konsentrasi kurang, cocok minangka reagen deteksi PCR kuantitatif fluoresensi dhuwur.
3. Kanggo primer kanthi suhu anil sing luwih murah utawa luwih saka fragmen 200bp, dianjurake cara 3 langkah.
4. Efisiensi panggunaan dUTP lan sensitivitas enzim UNG beda-beda kanggo gen target sing beda-beda, mula yen nggunakake sistem UNG nyebabake nyuda sensitivitas deteksi, sistem reaksi kudu diatur lan dioptimalake.Yen dhukungan teknis dibutuhake, hubungi perusahaan kita.
5. Gunakake area darmabakti lan pipettes sadurunge lan sawise amplifikasi, nyandhang sarung tangan sak operasi lan ngganti wong kerep;Aja mbukak tabung reaksi sawise PCR rampung kanggo nyilikake kontaminasi sampel dening produk PCR.
