2×HiF Taq plus Master Mix
Cat Nomer: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Kanthi Pewarna) minangka solusi 2×premixed siap digunakake sing ngemot Plus HIF DNA Polymerase, dNTP, lan buffer sing dioptimalake.Loro antibodi monoklonal ing suhu kamar sing nyandhet aktivitas polimerase lan aktivitas 3′→5′exonuclease ditambahake ing campuran master kanggo PCR Hot Start sing gampang lan spesifik.Faktor ekstensi ditambahake ing campuran master kanggo menehi enzim kapasitas amplifikasi fragmen sing dawa, dawa amplifikasi bisa nganti 13 kb, enzim kasebut nduweni aktivitas polimerase DNA 5′→3′ lan 3′→5′. aktivitas exonuclease, kasetyane 83 kaping luwih saka Taq DNA polimerase, yaiku 9 kali saka polimerase DNA biasa.Iku cocok kanggo amplifikasi Cithakan Komplek, produk amplifikasi punika pungkasan kethul.
2×HIF Taq plus Master Mix(Kanthi Dye) nduweni kaluwihan saka cepet lan gampang, sensitivitas dhuwur, specificity kuwat, stabilitas apik, etc., sistem reaksi mung perlu kanggo nambah primers lan Cithakan, lan bisa digedhèkaké dening loro- protokol langkah, simplifying langkah eksperimen lan irit wektu.Produk iki ngemot pewarna indikator elektroforesis, lan produk PCR bisa digunakake langsung kanggo elektroforesis.Kajaba iku, produk kasebut uga ngemot agen protèktif khusus, supaya campuran master bisa njaga aktivitas sing stabil sawise beku-thaw bola-bali.
Kahanan Panyimpenan
Produk kudu disimpen ing -25 ~ -15 ℃ kanggo 1 taun.
Spesifikasi
| Spesifikasi produk | Master Campuran |
| Konsentrasi | 2× |
| Wiwitan Panas | Dibangun ing Hot Start |
| Overhang | Blunt |
| Kacepetan reaksi | Cepet |
| Ukuran (Produk Akhir) | Nganti 13 kb |
| Kahanan kanggo transportasi | Es garing |
| jinis produk | Premixes PCR kasetyan dhuwur |
instruksi
1.Sistem Reaksi PCR
| Komponen | Volume (μL) |
| DNA Cithakan | Cocok |
| Primer maju (10 μmol/L) | 2.5 |
| Primer Reverse (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | kanggo 50 |
2.Dianjurake nggunakake macem-macem cithakan
| Jinis cithakan | Amplify fragmen saka 1 kb nganti 10 kb |
| DNA genomik | 50ng-200 ng |
| Plasmid utawa DNA virus | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (Aja ngluwihi 10% saka volume reaksi PCR pungkasan) |
3.Protokol Amplifikasi
1) Protokol Two-Step (template kompleksitas)
| Siklus langkah | Temp. | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitan | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 detik | 30-35 |
| Ekstensi | 68 ℃ | 30 sec/kb | |
| extension pungkasan | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Protokol Tiga Langkah (protokol reguler)
| Siklus langkah | Temp. | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitan | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 detik | 30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Ekstensi | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| extension pungkasan | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Protokol Gradien Annealing (template kompleksitas)
| Siklus langkah | Suhu | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitan | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 sek | 15 (pengurangan 1 ℃ saben siklus) |
| Anil gradien | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Ekstensi | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| Denaturasi | 98 ℃ | 10 sek |
20 |
| Annealing | 55 ℃ | 20 sek | |
| Ekstensi | 72 ℃ | 30 sec/kb | |
| extension pungkasan | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Fitur ing protokol amplifikasi sing beda
| Protokoll | Loro-Langkah | Telung langkah | Anil gradien |
| Spec. | cepet | medium | alon |
| Kekhususan | dhuwur | medium | dhuwur |
| asil PCR | medium | dhuwur | medium |
| Tingkat deteksi | dhuwur | medium | dhuwur |
Cathetan
Mangga nganggo PPE sing dibutuhake, jas lab lan sarung tangan, kanggo njamin kesehatan lan safety sampeyan!
