Kit Genotip Tikus

Cat Nomer: HCR2021A

Produk iki minangka kit sing dirancang kanggo identifikasi genotipe tikus kanthi cepet, kalebu ekstraksi kasar DNA lan sistem amplifikasi PCR.Prodhuk bisa digunakake kanggo amplifikasi PCR langsung saka buntut mouse, kuping, jempol lan jaringan liyane sawise cleavage prasaja dening Lysis Buffer lan Proteinase k.Ora ana pencernaan sewengi, ekstraksi phenol-chloroform utawa pemurnian kolom, sing prasaja lan nyepetake eksperimen sing akeh wektu.Produk kasebut cocog kanggo amplifikasi fragmen target nganti 2kb lan reaksi PCR multipleks kanthi 3 pasang primer.2×Tissue Tisu Langsung PCR Campuran ngemot polimerase DNA sing direkayasa sacara genetis, Mg²⁺, dNTPs lan sistem buffer optimized kanggo nyedhiyani efficiency amplifikasi dhuwur lan toleransi inhibitor, supaya reaksi PCR bisa digawa metu kanthi nambah cithakan lan primer lan rehydrating produk kanggo 1 ×.Produk PCR sing digedhekake karo produk iki nduweni basis "A" sing misuwur ing ujung 3 'lan bisa digunakake langsung kanggo kloning TA sawise dimurnèkaké.

Komponen

Kahanan Panyimpenan

Produk kudu disimpen ing -25 ~ -15 ℃ suwene 2 taun.Sawise thawing, Lysis Buffer bisa disimpen ing 2 ~ 8 ℃ kanggo short-term sawetara nggunakake, lan nyampur uga nalika nggunakake.

Aplikasi

Produk iki cocok kanggo analisis kalah tikus, deteksi transgenik, genotip lan liya-liyane.

Fitur

1.Operasi prasaja: ora perlu ngekstrak DNA genom;

2.Aplikasi Wide: cocok kanggo amplifikasi langsung saka macem-macem jaringan mouse.

instruksi

1.Pelepasan DNA genom

1) Preparation saka lysate

Lysate jaringan disiapake miturut jumlah conto tikus sing bakal dilisekake (lysate jaringan kudu disiapake ing situs miturut dosis lan dicampur kanthi tliti kanggo digunakake), lan proporsi reagen sing dibutuhake kanggo sampel siji kaya ing ngisor iki:

2) Persiapan Sampel lan Lisan

Dianjurake Gunakake Tisu

Njupuk jumlah cocok saka conto tissue mouse ing tabung centrifuge resik, nambah 200μL tissue seger lysate kanggo saben tabung centrifuge, vortex lan goyangake, banjur inkubasi ing 55 ℃ kanggo 30mins, lan banjur panas ing 98 ℃ kanggo 3mins.

3) Centrifugation

Goyangake lysate kanthi apik lan centrifuge ing 12.000 rpm suwene 5 menit.Supernatan bisa digunakake minangka template kanggo amplifikasi PCR.Yen cithakan dibutuhake kanggo panyimpenan, transfer supernatant menyang tabung centrifuge steril liyane lan simpen ing -20 ℃ suwene 2 minggu.

2.Amplifikasi PCR

Copot 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix saka -20 ℃ lan thaw ing es, nyampur regane mudhun lan nyiyapake sistem reaksi PCR miturut tabel ing ngisor iki (operasi ing es):

Cathetan:

a) Jumlah sing ditambahake ora kudu ngluwihi 1/10 saka sistem, lan yen kakehan ditambahake, amplifikasi PCR bisa dicegah.

Kahanan PCR sing disaranake

Cathetan:

a) Suhu Annealing: Kanthi referensi kanggo Nilai Tm saka sepisanan, dianjurake kanggo nyetel suhu annealing kanggo Nilai Tm cilik saka sepisanan +3 ~ 5 ℃.

Masalah Umum lan Solusi

1.Ora ana strip sing ditargetake

1) Produk lisis sing berlebihan.Pilih jumlah cithakan sing paling cocok, biasane ora luwih saka 1/10 saka sistem;

2) Ukuran sampel sing gedhe banget.Dilute lysate kaping 10 lan banjur amplify, utawa nyuda ukuran sampel lan re-lysis;

3) Sampel jaringan ora seger.Disaranake nggunakake sampel jaringan seger;

4) Kualitas primer sing kurang.Gunakake DNA genomik kanggo amplifikasi kanggo verifikasi kualitas primer lan ngoptimalake desain primer.

2.Amplifikasi non-spesifik

1) Suhu annealing kurang banget lan nomer siklus dhuwur banget.Tambah suhu annealing lan nyuda jumlah siklus;

2) Konsentrasi Cithakan dhuwur banget.Ngurangi jumlah cithakan utawa dilute cithakan 10 kaping sawise amplifikasi;

3) Spesifisitas primer sing kurang.Ngoptimalake desain primer.

Cathetan

1.Kanggo ngindhari kontaminasi salib ing antarane conto, macem-macem alat sampling kudu disiapake, lan permukaan piranti bisa di resiki nganggo larutan natrium hipoklorit 2% utawa pembersih asam nukleat sawise saben sampling yen perlu nggunakake bola-bali.

2.Disaranake nggunakake jaringan mouse seger, lan volume sampling ngirim ora gedhe banget supaya ora mengaruhi asil amplifikasi.

3.Lysis Buffer ngirim supaya Kerep beku-thaw, lan bisa disimpen ing 2 ~ 8 ℃ kanggo short-term sawetara nggunakake.Yen disimpen ing suhu sing sithik, udan bisa kedadeyan, lan kudu dibubarake kanthi lengkap sadurunge digunakake.

4.Campuran PCR kudu ngindhari beku-thaw, lan bisa disimpen ing suhu 4 ℃ kanggo panggunaan bola-bali jangka pendek.

5.Produk iki mung kanggo riset eksperimen ilmiah lan ora bisa digunakake ing diagnosis klinis utawa perawatan.