Siji Langkah RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat Nomer: HCB5140A
Siji Langkah RT-qPCR Syber Green Premix kanggo kuantifikasi fluoresensi adhedhasar pewarna SYBR Green I.Nggunakake primer spesifik gen, transkripsi mbalikke lan reaksi qPCR rampung ing siji tabung, ngilangi kabutuhan kanggo operasi tutup tutup lan pipetting bola-bali, ningkatake efisiensi tes lan nyuda resiko kontaminasi.Kanggo conto RNA, kit kasebut nggunakake Reverse Transcriptase tahan panas kanggo sintesis cDNA sing efisien lan HotStart Taq DNA Polymerase kanggo amplifikasi kuantitatif.Ing sistem buffer sing dioptimalake, sensitivitas kit bisa nganti 0,1 pg kanggo target sing diucapake lan nganti 1 pg kanggo target sing diucapake kanthi moderat.Kit kasebut cocok kanggo amplifikasi lan kuantifikasi sampel DNA.Iki ngidini deteksi sensitif lan kuantifikasi asam nukleat saka macem-macem conto tanduran lan kewan, sel lan mikroorganisme.
Komponen
| No | jeneng | Volume | Volume |
| 1 | Buffer majeng | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Campuran Enzim Lanjut | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Free H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Kahanan Panyimpenan
Produk iki kudu disimpen ing -25 ~ -15 ℃ adoh saka cahya kanggo 1 taun.
instruksi
1. Konfigurasi sistem reaksid
| Komponen | Volume (μL) | Volume (μL) | Konsentrasi pungkasan |
| Buffer majeng | 12.5 | 25 | 1× |
| Campuran Enzim Lanjut | 1 | 2 | - |
| Primer Maju (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol / L |
| Primer Reverse (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol / L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase Free H2Oc | kanggo 25 | kanggo 50 | - |
Cathetan:
1) a.TKonsentrasi primer pungkasan yaiku 0.2 μmol/L, sing uga bisa diatur antara 0.1 lan 1μmol/L sing cocog.
2) b.Reagen banget sensitif, kanthi Total RNA ing kisaran 1pg-1μg, lan uji coba sampel manungsa nuduhake input optimal 1 pg-100 ng, ngontrol nilai Ct sakabèhé ing kisaran 15-30 sing cocog.
3) c.Disaranake nggunakake 20μL utawa 50μL kanggo njamin validitas lan reproducibility amplifikasi gen target.
4) d.Mangga nyiyapake ing bangku ultra-resik lan gunakake tips lan tabung reaksi tanpa residu nuklease;tips karo cartridges Filter dianjurake.Ngindhari kontaminasi silang lan kontaminasi aerosol.
2.Program reaksi
| Siklus langkah | Temp. | Wektu | Siklus |
| Transkripsi mbalikke | 50 ℃a | 6menit | 1 |
| Denaturasi wiwitan | 95 ℃ | 5 menit | 1 |
| Reaksi amplifikasi | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Tahap kurva leleh | Instrumen Default | 1 | |
Cathetan:
1) a.Suhu transkripsi mbalikke bisa dipilih antarane 50-55 ° C miturut kabutuhan eksperimen.Kanggo conto DNA, proses transkripsi mbalikke bisa diilangi.
2) b.Ing kasus khusus suhu annealing / extension bisa diatur miturut nilai Tm primer, dianjurake 60 ° C.
Cathetan
1. Produk iki mung kanggo riset.
2. Mangga operate nganggo jas lab lan sarung tangan, kanggo safety sampeyan.
