Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat Nomer: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) yaiku kit PCR kuantitatif multiplex adhedhasar RNA minangka cithakan.Ing proses eksperimen, transkripsi terbalik lan PCR kuantitatif ditindakake ing tabung sing padha, sing nyederhanakake operasi eksperimen lan nyuda risiko kontaminasi.Ing kit iki, untaian cDNA pisanan disintesis kanthi efisien dening Reverse Transcriptase tahan panas lan digedhekake sacara kuantitatif dening HotStart Tag DNA Polymerase.Kit kasebut utamane ngemot buffer MP sing dioptimalake, campuran enzim, lsp. Solusi buffer wis ngemot Mg2+lan dNTP.Kajaba iku, faktor-faktor sing bisa nyandhet amplifikasi PCR sing ora spesifik lan nambah efisiensi amplifikasi saka pirang-pirang reaksi qPCR ditambahake, sing bisa njamin efisiensi amplifikasi lan nindakake nganti pirang-pirang reaksi amplifikasi.Sistem dUTP/UDG ditambahake kanggo nyegah risiko kontaminasi aerosol kanthi efektif.
Komponen
1. Buffer
2. Campuran enzim
Spesifikasi
| Wiwitan Panas | Dibangun ing wiwitan panas |
| Metode deteksi | Deteksi primer-probe |
| metode PCR | Siji langkah RT-qPCR |
| Polimerase | Taq DNA polimerase |
| Jinis sampel | DNA |
Kahanan Panyimpenan
Prodhuk dikirim nganggo es garing lan bisa disimpen ing -25 ~ -15 ℃ suwene 1 taun.Sampeyan kudu nyingkiri asringbeku-thaw.Disaranake kanggo nyimpen kanthi kapisah.
instruksi
1.Reaksi Sistem
| Komponen | Volume (μL) | Konsentrasi pungkasan |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Campuran enzim | 1 | - |
| Campuran Primer/Probe (2,5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Cithakan RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | kanggo 25 | - |
Cathetan:
Dadi manawa kanggo nyampur uga sadurunge digunakake, supaya umpluk gedhe banget disebabake geter kasar.
a.Konsentrasi primer: Campuran primer kalebu primer multipleks, gumantung saka kahanan konsentrasi primer sing optimal bisa uga antara 0.l lan 1.0μM.
b.Konsentrasi probe: Campuran probe kalebu klompok pelabelan multipleks probe bedane fluoresensi, gumantung saka kahanan konsentrasi probe sing optimal bisa uga antara 0,05 lan 0,5μM.
c.Pengenceran cithakan: qPCR sensitif banget lan dianjurake kanggo ngencerake cithakan.Nilai Ct kontrol cocok antarane 20 lan 35.
d.Persiapan sistem: Mangga nyiyapake ing meja kerja sing resik banget, lan pipettor lan tabung reaksi tanpa residu nuklease;dianjurake kanggo nggunakake sirah gun karo unsur Filter.Ngindhari kontaminasi silang lan kontaminasi aerosol.
2. Optimized CyclingProtokol
| Sepeda; Pit; ontel langkah | Temp. | Wektu | Siklus |
| Transkripsi mbalikke | 50 ℃a | 20 menit | 1 |
| Denaturasi wiwitan | 95 ℃ | 5 menit | 1 |
| Reaksi amplifikasi | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 detik c |
Cathetan:
a.Transkripsi mbalikke: Suhu bisa milih 42°C utawa 50°C.
b.Reaksi amplifikasi: Suhu diatur miturut nilai Tm saka primer sing dirancang.
c.Akuisisi sinyal fluoresensi: Nyetel prosedur eksperimen miturut syarat manual instrumen.
Cathetan
Mangga nganggo PPE sing dibutuhake, kayata jas lab lan sarung tangan, kanggo njamin kesehatan lan safety sampeyan.
