Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Biru)
Cat Nomer: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) minangka solusi pra-solusi kanggo amplifikasi PCR kuantitatif 2 × nyata-nyata sing ditondoi kanthi sensitivitas lan spesifisitas sing dhuwur, warnane biru, lan nduweni efek pelacakan tambahan sampel.Komponen inti Taq DNA polymerase nggunakake wiwitan panas antibodi kanggo nyegah amplifikasi non-spesifik kanthi efektif amarga anil primer sajrone persiapan sampel.Ing wektu sing padha, rumus nambah faktor mromosiaken kanggo nambah efficiency amplifikasi reaksi PCR lan equalize amplifikasi gen karo isi GC beda (30 ~ 70%), supaya PCR kuantitatif bisa diwenehi hubungan linear apik ing kuantitatif sudhut. wilayah.Produk iki ngandhut ROX Passive Reference Dye khusus, sing ditrapake kanggo paling instrumen qPCR.Ora perlu nyetel konsentrasi ROX ing macem-macem instrumen.Sampeyan mung perlu nambah primer lan template kanggo nyiapake sistem reaksi kanggo amplifikasi.
Komponen
Campuran Master qPCR Biru Universal
Kondisi panyimpenan
Produk dikirim nganggo bungkus es lan bisa disimpen ing -25 ℃ ~ -15 ℃ suwene 18 wulan.Sampeyan perlu kanggo ngindhari iradiasi cahya sing kuwat nalika nyimpen utawa nyiapake sistem reaksi.
Spesifikasi
| Konsentrasi | 2× |
| Metode deteksi | SYBR |
| metode PCR | qPCR |
| Polimerase | Taq DNA polimerase |
| Jinis sampel | DNA |
| Peralatan aplikasi | Paling instrumen qPCR |
| jinis produk | Premix SYBR kanggo PCR kuantitatif fluoresensi nyata-wektu |
| Aplikasi menyang (aplikasi) | Ekspresi Gen |
instruksi
1. Sistem Reaksi
| Komponen | Volume (μL) | Volume (μL) | Konsentrasi pungkasan |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Primer Maju (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol / L |
| Primer Reverse (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0,2 μmol / L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | nganti 50 | nganti 20 | - |
[Cathetan]: Campur sak tenane sadurunge digunakake kanggo ngindhari gelembung sing gedhe banget saka goyang sing kuat.
a) Konsentrasi primer: Konsentrasi primer pungkasan yaiku 0.2μmol/L, lan uga bisa diatur antara 0.1 lan 1.0μmol/L sing cocog.
b) Konsentrasi Cithakan: Yen cithakan punika undiluted solusi Simpenan cDNA, volume digunakake ngirim ora ngluwihi 1/10 saka total volume reaksi qPCR.
c) Pengenceran cithakan: Disaranake ngencerake solusi stok cDNA kanthi kaping 5-10.Jumlah optimal cithakan sing ditambahake luwih apik nalika nilai Ct sing dipikolehi kanthi amplifikasi yaiku 20-30 siklus.
d) Sistem reaksi: Disaranake nggunakake 20μL utawa 50μL kanggo njamin efektifitas lan pengulangan amplifikasi gen target.
e) Persiapan sistem: Mangga nyiyapake ing bangku super resik lan gunakake tips lan tabung reaksi tanpa residu nuklease;dianjurake kanggo nggunakake tips karo cartridges Filter.Ngindhari kontaminasi silang lan kontaminasi aerosol.
2.Program reaksi
Program Standar
| Siklus langkah | Temp. | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitan | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10 sek | 40 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 30 detik★ | |
| Tahap kurva leleh | Instrumen Default | 1 | |
Program cepet
| Siklus langkah | Temp. | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitan | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 3 sek | 40 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 20 detik★ | |
| Tahap kurva leleh | Instrumen Default | 1 | |
[Cathetan]: Program cepet cocok kanggo mayoritas gen, lan program standar bisa dicoba kanggo gen struktur sekunder kompleks individu.
a) Suhu lan wektu Annealing: Mangga nyetel miturut dawa primer lan target gen.
b) Akuisisi sinyal fluoresensi (★): Nyetel prosedur eksperimen miturut syarat ing pandhuan kanggo nggunakake instrumen.
c) Kurva lebur: Program standar instrumen bisa digunakake kanthi normal.
3. Analisis Asil
Minimal telung replika biologis dibutuhake kanggo eksperimen kuantitatif.Sawise reaksi kasebut, kurva amplifikasi lan kurva leleh kudu dikonfirmasi.
3.1 Kurva amplifikasi:
Kurva amplifikasi standar yaiku S-shaped.Analisis kuantitatif paling akurat nalika nilai Ct tiba antarane 20 lan 30. Yen nilai Ct kurang saka 10, perlu kanggo ngencerake cithakan lan nindakake tes maneh.Nalika nilai Ct antarane 30-35, perlu kanggo nambah konsentrasi cithakan utawa volume sistem reaksi, supaya minangka kanggo nambah efficiency amplifikasi lan njamin akurasi analisis asil.Nalika nilai Ct luwih saka 35, asil tes ora bisa nganalisis ekspresi gen kanthi kuantitatif, nanging bisa digunakake kanggo analisis kualitatif.
3.2 Kurva lebur:
Puncak tunggal kurva leleh nuduhake yen spesifisitas reaksi apik lan analisis kuantitatif bisa ditindakake;yen kurva leleh nuduhake puncak kaping pindho utawa kaping pirang-pirang, analisis kuantitatif ora bisa ditindakake.Kurva leleh nuduhake puncak kaping pindho, lan perlu kanggo ngadili manawa puncak non-target minangka dimer primer utawa amplifikasi non-spesifik dening elektroforesis gel agarose DNA.Yen dimer sepisanan, dianjurake kanggo nyuda konsentrasi primer utawa ngrancang ulang primer kanthi efisiensi amplifikasi sing dhuwur.Yen amplifikasi non-spesifik, tambahake suhu anil, utawa ngrancang ulang primer kanthi spesifik.
Cathetan
Mangga nganggo APD sing dibutuhake, jas lab lan sarung tangan, kanggo njamin kesehatan lan safety!
Produk iki mung kanggo riset!
