Inhibitor Rnase
Inhibitor Murine RNase minangka inhibitor murine RNase rekombinan sing diekspresikake lan diresiki saka E.coli.Ikatan karo RNase A, B utawa C ing rasio 1: 1 liwat ikatan non-kovalen, saéngga nyegah aktivitas telung enzim lan nglindhungi RNA saka degradasi.Nanging, ora efektif marang RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H utawa RNase saka Aspergillus.Inhibitor Murine RNase diuji dening RT-PCR, RT-qPCR lan IVT mRNA, lan kompatibel karo macem-macem transkripase Reverse komersial, polimerase DNA lan polimerase RNA.
Dibandhingake karo inhibitor RNase manungsa, inhibitor murine RNase ora ngemot rong sistein sing sensitif banget marang oksidasi sing nyebabake inaktivasi inhibitor kasebut.Sing nggawe stabil ing konsentrasi rendah DTT (kurang saka 1 mM).Fitur iki cocog kanggo digunakake ing reaksi sing konsentrasi DTT sing dhuwur mbebayani kanggo reaksi kasebut (contone, RT-PCR wektu nyata).
Application
Produk iki bisa digunakake kanthi akeh ing eksperimen apa wae ing ngendi gangguan RNase bisa nyegah degradasi RNA, kayata:
1.Sintesis untaian pertama cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, lsp.
2.Nglindhungi RNA saka degradasi sajrone transkripsi/terjemahan in vitro (contone, sistem replikasi virus in vitro).
3.Inhibisi aktivitas RNase sajrone pamisahan lan purifikasi RNA.
Kahanan Panyimpenan
Produk bisa disimpen ing -25～- 15 ℃, valid kanggo 2 taun.
Buffer panyimpenan
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT lan 50% gliserol.
Definisi unit
Jumlah inhibitor RNase murine sing dibutuhake kanggo nyandhet aktivitas 5ng ribonuclease A kanthi 50% ditetepake minangka siji unit (U).
Bobot molekul protein
Bobot molekul murine RNase inhibitor yaiku 50 kDa.
Kontrol kualitas
Exonuclease Kegiatan:
40 U saka inhibitor RNase murine kanthi 1 μg λ -Hind III nyerna DNA ing 37 ℃ sajrone 16 jam ora ngasilake degradasi kaya sing ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
Aktivitas Endonuklease:
40 U inhibitor RNase murine kanthi 1μg λ DNA ing 37 ℃ sajrone 16 jam ora ngasilake degradasi kaya sing ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
Nicking Kegiatan:
40U saka inhibitor RNase murine kanthi 1μg pBR322 ing 37 ℃ sajrone 16 jam ora ngasilake degradasi kaya sing ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
RNase Kegiatan:
40U saka murine RNase inhibitor karo 1.6μg MS2 RNA kanggo 4h ing 37 ℃ ora ngasilaken degradasi minangka ditemtokake dening elektroforesis gel agarose.
E.coli DNA:
40 U saka murine RNase inhibitor disaring kanggo ngarsane E. coli DNA genom nggunakake TaqMan qPCR karo primers khusus kanggo E. coli 16S rRNA locus.Kontaminasi DNA genom E. coli yaiku ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1.Oscillation kasar utawa aduk bakal mimpin kanggo inaktivasi enzim.
2.Kisaran suhu paling luweh saka inhibitor iki yaiku 25-55 ℃, lan ora aktif ing 65 ℃ lan ndhuwur.
3. Aktivitas RNase H, RNase 1 lan RNase T1 ora dicegah dening inhibitor RNase murine.
4. Inhibisi aktivitas RNase ditemokake ing sawetara pH (pH 5-9 kabeh aktif), lan aktivitas paling dhuwur diamati ing pH 7-8.
5. Amarga ribonucleases biasane nahan aktivitas ing kahanan denaturasi, care kudu dijupuk kanggo nyegah denaturing molekul RNase Inhibitor kang wis Komplek karo ribonuclease a.Kanggo nyegah ribonuclease aktif, suhu luwih saka 50 °C lan konsentrasi urea utawa agen denaturasi liyane kudu dihindari.
