Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) minangka polipeptida untai tunggal sing ngandhut 4 ikatan disulfida kanthi bobot molekul watara 13,7 kDa.RNase A minangka endoribonuklease sing khusus ngrusak RNA untai tunggal ing residu C lan U.Secara khusus, pembelahan kasebut ngenali ikatan fosfodiester sing dibentuk dening 5'-ribosa saka nukleotida lan gugus fosfat ing 3'-ribosa nukleotida pirimidin sing jejer, saéngga fosfat 2, 3'-siklik dihidrolisis dadi 3 sing cocog. fosfat nukleosida (eg pG-pG-pC-pA-pG dipecah dening RNase A kanggo ngasilake pG-pG-pCp lan A-PG).RNase A paling aktif kanggo mecah RNA untai tunggal.Konsentrasi kerja sing disaranake yaiku 1-100μG / mL, kompatibel karo macem-macem sistem reaksi.Konsentrasi uyah sing sithik (0-100 mM NaCl) bisa digunakake kanggo ngethok rantai RNA untai tunggal, RNA untai ganda, lan RNA sing dibentuk dening hibridisasi RNA-DNA.Nanging, ing konsentrasi uyah dhuwur (≥0.3 M), RNase A mung khusus mecah RNA untai tunggal.
RNase A paling umum digunakake kanggo mbusak RNA sajrone nyiapake DNA plasmid utawa DNA genom. Apa DNase aktif utawa ora sajrone proses persiapan bisa gampang mengaruhi reaksi kasebut.Cara tradisional nggodhok ing adus banyu bisa digunakake kanggo mateni aktivitas DNase.Produk iki ora ngemot DNase lan protease, lan ora mbutuhake perawatan panas sadurunge digunakake.Kajaba iku, produk iki uga bisa digunakake ing eksperimen biologi molekuler kayata analisis proteksi RNase lan analisis urutan RNA.
Kahanan Panyimpenan
Prodhuk bisa disimpen ing -25 ~ -15 ℃, valid kanggo 2 taun.
instruksi
Iki minangka salah sawijining cara umum kanggo nyiapake solusi panyimpenan RNase A.Uga bisa disiapake deningmetode liyane miturut metode tradisional ing laboratorium utawa literatur referensi (kayatalangsung larut ing 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 utawa larutan Tris-NaCl)
1. Gunakake 10 mM natrium asetat (pH 5.2) kanggo nyiyapake 10 mg/mL larutan panyimpenan RNase A
2. Pemanasan ing 100 ℃ kanggo 15 min
3. Kelangan nganti suhu kamar, tambahake 1/10 volume 1 M Tris-HCl (pH 7,4), atur pH dadi 7,4 (kanggocontone, tambahake 500 ml larutan panyimpenan RNase 10g/ml 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-dikemas ing -20 ℃ kanggo panyimpenan beku, sing bisa stabil nganti 2 taun.
[Cathetan]: Nalika nggodhok solusi RNaseA ing kondisi netral, udan RNase bakal dibentuk;Godhok ing pH sing luwih murah, lan yen ana udan, bisa diamati, sing bisa uga disebabake dening anané impurities protein.Yen endapan ditemokake sawise nggodhok, impurities bisa dibusak dening sentrifugasi kacepetan dhuwur (13000rpm), lan banjur sub-dikempalken kanggo panyimpenan beku.
informasi produk
| sinonim | Ribonuklease I;ribonuklease pankreas;Ribonuklease 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolase;Rnase A;Endoribonulsease I |
| Nomer CAS | 9001-99-4 |
| Penampilan | Wêdakakêna lyophilized putih |
| Bobot molekul | ~ 13,7 kDa (urutan asam amino) |
| Nilai Ph | 7.6 (rentang kegiatan 6-10) |
| Suhu sing cocog | 60 ℃ (Rentang aktivitas 15-70 ℃) |
| Agen ngaktifake | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Inhibitor Rnase |
| Metode nonaktif | Ora bisa diaktifake kanthi pemanasan, disaranake nggunakake kolom centrifuge |
| asale | sapi |
| Kelarutan | Larut ing banyu (10mg/ml) |
| Mundhut ing garing | ≤5,0% |
| Aktivitas enzim | ≥60 unit Kunitz/mg |
| Titik isoelektrik | 9.6 |
Cathetan
Kanggo safety lan kesehatan, mangga nganggo jas lab lan sarung tangan kanggo operasi.
