Wild Taq DNA Polimerase
Taq DNA Polymerase minangka polimerase DNA termostabil saka Thermus aquaticus YT-1, sing nduweni aktivitas polimerase 5′→3′ lan aktivitas endonuklease flap 5′.
Komponen
| Komponen | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Kondisi panyimpenan
Transportasi ing ngisor 0 ° C lan disimpen ing -25 ° C ~ -15 ° C.
Definisi Unit
Siji unit ditetepake minangka jumlah enzim sing nggabungake 15 nmol dNTP dadi bahan sing ora larut asam sajrone 30 menit ing suhu 75 ° C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kemurnian Protein (SDS-PAGE):Kemurnian Taq DNA polymerase ≥95% ditemtokake dening analisis SDS-PAGE.
2.EndAktivitas onuclease:Minimal 5 U saka Taq DNA polymerase kanthi 1 μg λDNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ℃ ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
3.Aktivitas Eksonuklease:Minimal 5 U saka Taq DNA polymerase kanthi 1 μg λ -Hind Ⅲ nyerna DNA sajrone 16 jam ing suhu 37 ℃ ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
4.Aktivitas Nickase:Minimal 5 U saka Taq DNA polymerase kanthi 1 μg pBR322 DNA sajrone 16 jam ing suhu 37°C ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
5.Aktivitas RNase:Minimal 5 U saka Taq DNA polymerase kanthi 1,6 μg MS2 RNA sajrone 16 jam ing suhu 37°C ora nyebabake degradasi sing bisa dideteksi kaya sing ditemtokake.
6.E. coliDNA:5 U saka Taq DNA polymerase disaring kanggo anané DNA genom E. coli nggunakake TaqMan qPCR kanthi primer khusus kanggo lokus E. coli 16S rRNA.Kontaminasi DNA genom E. coli yaiku ≤1 Salinan.
7.Amplifikasi PCR (5.0 kb DNA Lambda)- Reaksi 50 µL ngemot 5 ng Lambda DNA kanthi 5 unit Taq DNA Polymerase kanggo 25 siklus amplifikasi PCR ngasilake produk 5.0 kb sing dikarepake.
Setelan Reaksi
| Komponen | Volume |
| Cithakan DNAa | opsional |
| Primer Maju 10 μM | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| Campuran dNTP (masing-masing 10mM) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μl |
| Taq DNA Polimeraseb | 0,25 μL |
| Banyu tanpa nuklir | Iki 50 μL |
Cathetan:
1) Konsentrasi reaksi optimal saka cithakan beda beda.Tabel ing ngisor iki nuduhake panggunaan cithakan sing disaranake kanggo sistem reaksi 50 µL.
| DNA | Jumlah |
| Genomik | 1 ng-1 μg |
| Plasmid utawa Viral | 1 pg-1 ng |
2) Konsentrasi optimal Taq DNA Polymerase bisa uga beda-beda saka 0,25 µL~1 µL ing aplikasi khusus.
ReaksiProgram
| Langkah | Suhu(°C) | Wektu | Siklus |
| Denaturasi wiwitana | 95 ℃ | 5 menit | - |
| Denaturasi | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Siklus |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Ekstensi | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Ekstensi Akhir | 72 ℃ | 5 menit | - |
Cathetan:
1) Kondisi denaturasi awal cocok kanggo umume reaksi amplifikasi lan bisa diowahi miturut kerumitan struktur cithakan.Yen struktur cithakan rumit, wektu pra-denaturasi bisa ditambah nganti 5 - 10 menit kanggo nambah efek denaturasi awal.
2) Suhu annealing kudu diatur miturut nilai Tm sepisanan, sing umume disetel dadi 3 ~ 5 ℃ luwih murah tinimbang nilai Tm sepisanan;Kanggo Cithakan Komplek, perlu kanggo nyetel suhu annealing lan ngluwihi wektu extension kanggo entuk amplifikasi efisien.
