Suhu Sensitif UNG
Suhu Sensitif UNG (TS-UNG) dipikolehi kanthi ekspresi rekombinan ing E. coli.Enzim kasebut nyepetake pelepasan urasil gratis saka DNA untai tunggal lan ganda sing ngemot urasil lan ora aktif marang RNA.Dibandhingake karo enzim UNG konvensional asal gen E. coli, enzim TS-UNG nduweni aktivitas sing luwih dhuwur ing suhu sing kurang (20 ℃ ~ 37 ℃) lan sensitif suhu lan gampang diaktifake (50 ℃), ngindhari degradasi amplifikasi sing ngemot dUTP. produk ing suhu kamar kanthi aktivitas residual sing bisa tetep sawise inaktivasi enzim UNG konvensional.Mulane, enzim TS-UNG ora mung cocok kanggo reaksi pencegahan kontaminasi PCR, nanging uga cocog karo program amplifikasi RT-PCR lan bisa digunakake ing reaksi pencegahan kontaminasi RT-PCR.
Aplikasi sing Disaranake
Amplifikasi Nyegah Kontaminasi
Kondisi panyimpenan
-20 ° C kanggo panyimpenan jangka panjang, kudu dicampur kanthi becik sadurunge digunakake, supaya ora beku-thaw.
Buffer panyimpenan
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Gliserol.
Definisi Unit
Jumlah enzim sing dibutuhake kanggo ngurai 1µg DNA untai tunggal sing ngandhut basa dU sajrone 1 jam ing suhu 37°C yaiku 1 unit aktivitas (U).
Kontrol kualitas
1.SDS-PAGE kemurnian elektroforesis luwih saka 98%
2.Aktivitas degradasi, kontrol batch-to-batch, stabilitas
3.Ora ana aktivitas nuklease eksogen, ora ana kontaminasi endonuklease eksogen utawa eksonuklease.
instruksi
| Komponen | Volume (μL) | Konsentrasi pungkasan |
| 10 × PCR Buffer (bebas dNTP, Mg²+gratis) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ganti dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μl | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Cithakan | - | <1μg/reaksi |
| ddH₂O | Kanggo 50 | - |
Cathetan: a: Yen digunakake kanggo qPCR/qRT-PCR, probe fluoresensi kudu ditambahake menyang sistem reaksi.Biasane, konsentrasi primer pungkasan 0,2 μM bisa menehi asil sing apik;nalika kinerja reaksi kurang, konsentrasi primer bisa diatur ing kisaran 0.2-1 μM.Biasane, konsentrasi probe dioptimalake ing kisaran 0,1-0,3 μM.Eksperimen gradien konsentrasi bisa ditindakake kanggo nemokake kombinasi primer lan probe sing paling apik.
Cathetan
1.Suhu reaksi optimal enzim TS-UNG relatif kurang, lan bisa dioptimalake ing kisaran 20 ℃ ~ 37 ℃, dosis enzim lan wektu reaksi bisa dioptimalake ing kisaran 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;lan enzim bisa diaktifake ing proses transkripsi mbalikke.
2.Cocog kanggo PCR lan RT-PCR kanggo nyegah kontaminasi.
3.Aja kerep beku-thaw, lan aja nyedhiyakake fluktuasi suhu sing gedhe.
4.Gen sing beda kanggo digedhekake duwe efisiensi panggunaan dUTP lan sensitivitas enzim UNG sing beda, mula, yen nggunakake sistem UNG nyebabake nyuda sensitivitas deteksi, sistem reaksi kudu diatur lan dioptimalake, yen sampeyan butuh dhukungan teknis, hubungi perusahaan kita.
